农药残留的酶活性抑制与免疫分析技术的免疫分析法(七)

时间:2019-03-04 06:31:40 来源:凤凰彩票网 作者:匿名



5.胶体金标记免疫测定:胶体金免疫测定(CGIA)通常使用紫红色金纳米粒子标记抗体。当金标记的抗体累积到一定密度时,它们呈现紫红色,这可以通过肉眼观察到。由此,可以定性地确定抗原 - 抗体反应结果或半定量地确定抗原 - 抗体反应结果。胶体金标记的药物和激素等小分子化合物的免疫分析通常采用竞争法,实际测量方法包括散斑泄漏法和免疫层析法。

(1)点漏方法:在塑料盒中填充吸水性强的垫,在垫的中间粘附一片硝化纤维(NC)膜,原始(CAg)吸附在中心。这个电影。二抗(Abz)吸附在侧面。洗涤去除释放并阻断硝酸纤维素膜上的剩余吸附位点。将待测样品和金标准抗农药抗体(Jinyi Ab)的混合物滴在硝酸纤维素膜的中心,样品中的农药与包衣原液竞争结合金标准抗农药抗体。洗净去除释放。如果样品中不含待测农药,则硝酸纤维素膜中心呈红色斑点(金-AbCAg);如果硝酸纤维素膜的中心不显色或比空白样品轻,则表明待测农药在样品中呈阳性。膜的边缘显示出红色斑点(Gold-Ab-Ab2),表明金标记的抗农药抗体(Gold-Ab)是有效的并且用作金标记的抗农药抗体的质量控制点。

(2)免疫层析:使用试纸作为载体进行免疫层析,在试纸下端的玻璃纤维上吸附适量的金标抗农药抗体(Gold-Ab),并吸附适量的原始(CAg)进行测试。在条带中间的硝酸纤维素膜上(图6-9中的T),测试条的上端吸附适量的二抗(Ab2)(图6-9中的C)。将待测样品溶液滴在测试条的底部,或将样品垫浸入待测样品溶液中。随着溶液向上扩散,玻璃纤维上的金标抗农药抗体溶解并结合样品中相应的农药。继续用液体上升。如果金标记的抗农药抗体上的农药结合位点被样品中相应的农药完全或部分占据,则金标抗农药抗体不能或仅部分结合最初固定在中端的涂层。测试条,因此不会产生颜色。或者颜色很浅,即正面。如果样品中不含相应的农药,则将上行的金标抗农药抗体与固定在测试条中端的涂层结合,形成紫红色的金-Ab-CAg复合物,是消极的。例如,金标记的抗农药抗体与测试条的上端结合并显色,表明金标记的抗农药抗体具有免疫活性,第二抗吸附位点用作质量控制点为金标抗农药抗体,第二抗体不明显。颜色表示测试条失败。可以用肉眼观察金标准免疫层析结果。不需要昂贵的测试设备。操作简单快捷。它可以定性确定或半定量确定。金 - 抗体 - 抗原复合物的颜色稳定,测试结果可以长期保存。

6.抗生物素蛋白生物素系统酶联免疫测定:抗生物素蛋白生物素系统(ABS)中的抗生物素蛋白是一种糖蛋白,相对分子质量约为65,000,每种抗生物素蛋白。该分子由四个与生物素结合的亚基组成。生物素分子含有活性羧基,相对分子质量很小(244)。标签方法很简单。生物素羟基琥珀酰亚胺酯可与各种类型的分子如蛋白质和糖形成生物素标记。生物素与抗生物素蛋白的结合是高度特异性的,其亲和力远大于抗原 - 抗体的亲和力,并且两者在组合时极其稳定。由于一种抗生物素蛋白可与四种生物素分子结合,因此抗生物素蛋白生物素酶系统可用于扩增酶联免疫吸附测定(ELISA)信号,灵敏度可提高8至10倍。现在常用的是抗生物素蛋白生物素系统酶联免疫测定(ABS-ELISA)包括酶标记的抗生物素蛋白生物素(LAB)系统和桥接的抗生物素蛋白生物素复合物(AB * C)系统。由于抗生物素蛋白生物素系统酶联免疫测定比常用的酶联免疫吸附测定更多地使用两种试剂,因此操作和反应步骤增加,并且关于在农药分析中应用的报道很少。

(7)其他免疫测定技术

1.脂质体扩增免疫测定:脂质体是合成的合成生物膜,其分散在水性介质中以形成封闭的双分子单层或多层膜。脂质体表面上的抗原或抗体的修饰,当发生抗原 - 抗体反应时,脂质体表面上的抗原 - 抗体复合物激活补体,导致脂质体溶解,释放出包含的标记物(如荧光)在脂质体中。释放的标记物的量与膜表面上形成的抗原 - 抗体复合物的量成比例,并相应地建立脂质体免疫测定(UA)。脂质体膜可含有数万种标记分子并具有高信号放大,这是提高免疫测定灵敏度的有效方法之一。2.温度控制的相分离免疫测定:温度控制的相分离免疫测定是将抗原或抗体固定在智能水凝胶上以允许在水中快速反应。在反应完成后,改变水凝胶的低临界相温度(LCST),随着凝胶沉淀使复合物沉淀,从而将抗原 - 抗体复合物与游离物质分离和浓缩,然后进行。检测可以显着提高检测灵敏度。

3.毛细管电泳免疫分析:毛细管电泳免疫分析法(CEIA)是一种免疫分析技术,它结合了毛细管电泳的强大分离能力和免疫分析的特异性。通过毛细管电泳分离含有靶抗原(或抗体)的样品提取物,并与相应的抗体(或抗原)反应以检测复合抗原或抗体。毛细管电泳免疫分析具有少量样品和高检测灵敏度。它已被广泛应用于临床试验,在农药等小分子化合物的痕量分析中具有一定的开发和应用价值。

4.流动注射免疫测定:流动注射免疫测定(FIIA)分为均匀流动注射免疫测定和非均相流动注射免疫测定,通常使用标记物。非均相流动注射免疫测定将抗体固定在载体膜上以产生均匀且可分段的膜条带。将薄膜条的一部分安装在密封的微槽中,通过流动注射仪将待测物体输入槽中,并与待测试的标记样品竞争结合固定在膜上的抗体,在液相(或固相)中,标记物浓度的变化程度与分析物的浓度有关,并通过匹配检测系统检测。均相流动注射免疫测定是在微通道中进行的均匀免疫反应,以检测反应前后标记信号的变化。流动注射仪通过计算机程序精确控制反应液的种类,流动方向,流速,反应时间,反应温度等,具有自动注射,自动检测,自动清洗,重复循环分析等功能,结合免疫测定的特异性,实现大量样品的高通量连续分析。5.免疫聚合酶链反应技术:免疫聚合酶链反应(PCR)技术是一种将免疫反应与聚合酶链反应(PCR)相结合的免疫分析方法。 DNA分子和抗体通过某种连接分子连接,DNA作为标记与抗体结合,然后进行免疫反应以形成抗原 - 抗体-DNA复合物。纯化复合物后,进行聚合酶链反应以扩增抗原 - 抗体-DNA复合物,从而扩增检测信号并提高检测灵敏度。

参考:农药残留分析

相关链接:

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[关键词]农药残留,酶活性抑制,免疫分析,国家标准物质网络

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